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Electroforesis en geles de poliacrilamida SDS (PAGE) con reducción retarda para separación de colágena I y III


La electroforesis en geles discontinuos de poliacrilamida con SDS constan de un gel concentrador y un gel separador. Esta técnica se utiliza frecuentemente para la separación de proteínas por peso molecular. En condiciones estándares de corrida (sin reducción retardada) la colágena tipo I y tipo III no pueden ser separadas. Sin embargo, cuando se realiza una reducción retardada, es decir se agrega β-mercaptoetanol cuando las muestras se encuentran en el gel separador, es posible separar la banda α1 de la colágena tipo I [α1(I)] de la banda α1 de la colágena tipo III [α1(III)]. Esta separación permite la cuantificación por densitometría para calcular el porcentaje de colágena I y III en las muestras. Esta cuantificación es importante ya que la relación de colágena I y III en los tejidos puede ser afectada por diversos procesos. Por ejemplo, durante el envejecimiento natural de la piel, así como en el proceso de reparación de heridas la relación de colágena I y III se modifica. Una alteración en la proporción de colágena I y III puede modificar las características biofísicas de la piel como es la elasticidad.

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